菌種保藏的方法很多，對于食藥用菌，液氮保 藏是一種公認的、長久有效的保藏方法，然 而陳燕妍在對擔子菌菌種 24 屬 43 種 122 株進行液 氮保藏時發(fā)現(xiàn)，靈芝屬的菌株有較明顯的失活， 顧金剛也指出，菌種進行液氮保藏需要對其進行優(yōu) 化才能得到較好的保藏效果。鑒于此，本文以 靈芝菌種為材料，對影響液氮保藏效果的降溫速 率、保護劑濃度、解凍溫度、培養(yǎng)基質和菌餅大小 等方面進行系統(tǒng)研究，以期掌握靈芝菌種的液氮保 藏技術，使之在靈芝種質資源的保藏中得到更好地 應用。恒溫培養(yǎng)箱 ( SHP-250 型，上海精宏實驗設備 有限公司) ，超凈工作臺 ( SW-CJ-2FD 型，上海博 迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠) ，手提式高壓蒸汽滅 菌鍋 ( YXQ-LS18SI 型，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī) 療設備廠) ，Cryo GenesisTMV5 程序降溫儀 ( 廣州 倍瑪特儀器設備有限公司) ，恒溫水浴鍋 ( HH-USA，上海赫田科學儀器有限公司) ，液氮罐 ( YDS30，山東博科科學儀器有限公司)。

    在液氮保藏中涉及多種因素，因此，找到最優(yōu) 的工藝是進行液氮保藏的核心。以往降溫處理過程 中，真菌一般常用的程序是以每分鐘 1 ℃ 降溫至 －30～ －40 ℃，然后迅速放入液氮中。本文對 靈芝菌種的降溫程序進行優(yōu)化時也發(fā)現(xiàn)，在 4 ～ －40 ℃時，以每分鐘 1 ℃速率進行降溫，菌種的活 力最高，但在常溫降至 4 ℃，卻是以每分鐘 4 ℃或 9 ℃的效果最好。而劉新銳等 在采用相同降溫 程序對香菇菌種進行液氮保藏時，復蘇后的菌種生 長速度無差異，這可能是不同種類食藥用菌本身的 特性差異引起的。